目的 探討遵義市漢族Eales病與人類白細胞抗原（HLA）A/B、HLA-DRB/DQB基因多態性和結核感染的相關性。方法 采用聚合酶鏈反應序列特異引物法（PCR-SSP）檢測Eales病組、肺結核組、正常對照組HLA-A/B、HLA-DRB/DQB共59個等位基因分布頻率，計算各組間優勢比（OR）及95%可信區間（CI）；對Eales病組與肺結核組的HLA-A02基因分布頻率做相關分析。Eales病組為臨床確診的Eales病患者47例；肺結核組為痰結核菌培養確診肺結核并排除眼部疾病的患者36例；正常對照組為與研究組患者年齡、性別、民族等因素無差異的100名健康人。Easle病組中，資料完整的39例Eales病患者根據病史及純結核菌素試驗（PPD）檢查結果分為4組，a組為既往或現在患肺結核患者，12例；b組為無結核感染患者，27例；c組為PPD檢查陽性者，27例；d組為PPD陰性者，12例。結果 Eales病組HLA-A02（OR=9.719，OR95% CI為4.377～21.580，P=0.000）、HLA-B07（OR=11.605，OR95% CI為2397～56.191，P=0.001）基因分布頻率高于正常對照組，差異有統計學意義，HLA-A11基因分布頻率低于正常對照組，差異有統計學意義（OR=0.495，OR95% CI為0.245～1.000，P=0.048）。肺結核組HLA-DRB16（OR=5.215，P=0.049）、HLA-A02（OR=18.87，P=0.000）基因分布頻率高于正常對照組，差異有統計學意義，HLA-A24基因分布頻率低于正常對照組，差異有統計學意義（OR=5.690，P=0.015）。a組與b組，c組與d組比較：HLA-A02、HLA-A11、HLA-B07基因分布頻率差異無統計學意義。在Eales病組、肺結核組、正常對照組間，HLA-A02、HLA-A24、HLA-B07、HLA-DRB16基因總體分布頻率比較，差異均有統計學意義，進一步行chi;2分割法在Eales病組、肺結核組間兩兩比較，肺結核組HLA-A24基因分布頻率低于Eales病組，差異有統計學意義（chi;2=7.289，P=0.007），而HLA-A02基因分布頻率無統計學意義(OR=0.515，P=0.202)。Eales病組與肺結核組HLA-A02基因相關性比較，差異無統計學意義（列聯系數0.412，P=0.064）。結論 Eales病可能存在遺傳易感性，HLA-A02和HLA-B07可能是遵義市漢族Eales病患者的遺傳易感基因，而HLA-A11可能是保護基因；HLA-DRB16和HLA-A02可能是遵義市漢族肺結核病的易感基因，而HLA-A24可能是保護基因。HLA-A02可能是遵義市漢族人群中Eales病和肺結核病共同的易感基因。
目的 觀察藍光照射對人視網膜色素上皮（RPE）細胞L-型鈣通道mRNA表達的影響。方法 體外培養的第4代人RPE細胞按隨機數字表法分為無光照組、光照組、光照+硝苯地平組和光照+（-）BayK8644組。（2000plusmn;500）Lux藍光照射6 h，終止細胞培養24 h。光照前加入硝苯地平和（-）BayK8644，濃度均為1times;10-5 mmol/L。熒光定量聚合酶鏈（PCR）技術檢測各組人RPE細胞L-型鈣通道alpha;1C亞型、alpha;1D亞型和alpha;1F亞型mRNA的表達。結果 熒光定量PCR產物alpha;1C、alpha;1D、alpha;1F和內參beta;-肌動蛋白的cDNA逆轉錄PCR擴增產物長度分別為68、157、125、186堿基對，產物的凝膠電泳結果顯示擴增條帶位置與以上片段相吻合。熒光定量PCR檢測結果顯示，光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達均高于無光照組，差異有統計學意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達均高于光照組，差異有統計學意義(P＜0.05)；光照+(-)BayK8644組alpha;1C mRNA的表達高于光照+硝苯地平組，差異有統計學意義(P＜0.05)。光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1D mRNA的表達均高于無光照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；光照+(-)BayK8644組alpha;1D mRNA的表達與光照組和光照+硝苯地平組比較，差異均有統計學意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組與光照組alpha;1D mRNA的表達比較，差異無統計學意義(P＞0.05）。光照組、光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1F mRNA的表達均高于無光照組，差異有統計學意義(P＜0.05)；光照+硝苯地平組、光照+(-)BayK8644組alpha;1F mRNA的表達均高于光照組，差異有統計學意義(P＜0.05)。結論 藍光照射可引起人RPE細胞L-型鈣通道中alpha;1C、alpha;1D及alpha;1F亞型mRNA表達不同程度的增高；1times;10-5 mmol/L硝苯地平不能對抗藍光對RPE細胞L-型鈣通道作用，而1times;10-5 mmol/L（-）Bay K8644可以增加以上3個亞基的表達。
目的 觀察不同細胞密度的微囊化人內皮抑素/293（hES/293）細胞生物學性狀及其對人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）增生的抑制作用。方法 采用聚電解質絡合法制作不同密度微囊化hES/293細胞，分為1×104個/ml組（A組）、1×106個/ml組（B組）、1×108個/ml組（C組）；同時將微囊內不包裹hES/293細胞者設為對照組（D組）；每組6個樣本。培養后1、3、7、14、35 d，錐蟲藍染色計數微囊囊內細胞總數、活細胞數和存活率；噻唑藍（MTT）比色法檢測各組微囊化hES/293細胞的生長情況；酶聯免疫吸附試驗（ELISA）法檢測微囊化hES/293細胞囊外內皮抑素（ES）蛋白釋放量。取生長狀態良好的HUVEC分別與A、B、C、D組微囊化hES/293細胞共同培養。于共同培養后24、72、120 h，MTT比色法檢測微囊化hES/293細胞對HUVEC增生的抑制作用。結果 A、B、C組微囊囊內hES/293細胞總數和活細胞數均隨時間延長而增多，囊內細胞存活率于培養后3 d最高。A、B、C組微囊化hES/293細胞生長速率比較，培養后1 d時組間差異無統計學意義（P＞0.05）；培養后3 d，A組較B、C組高，差異有統計學意義（P＜0.05）；培養后7、14、35 d，B組較A、C組高，差異有統計學意義（P＜0.05）。A、B、C組微囊化hES/293細胞囊外ES蛋白釋放量比較，培養后1、14 d時組間差異無統計學意義（P＞0.05）；培養后3 d，A組較B、C組高，差異有統計學意義（P＜0.05）；培養后7、35 d，B組較A組高，差異有統計學意義（P＜0.05）。共同培養后24 h，A、B、C組對HUVEC均未表現出抑制作用（P＞0.05）；共同培養后72、120 h，A、B、C組均明顯抑制HUVEC增生，差異有統計學意義（P＜0.05）。結論細胞密度為1×106個/ml的微囊化hES/293細胞生長穩定、存活率較高，可持續穩定的釋放ES蛋白。不同密度的微囊化hES/293細胞均可抑制HUVEC增生。
目的 建立能穩定分泌人內皮抑素(hES)的基因工程細胞系，觀察內皮抑素（ES）蛋白和hES的表達。方法 以hES重組質粒pcDNA3.0（pcDNA3-Endo）為模板，通過逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)擴增獲得hES基因片段，且在基因前加信號肽序列，將其定向插入真核表達載體綠色熒光蛋白（pEGFP-N1)）質粒中，獲得重組質粒pEGFP-N1-ES；利用陽離子脂質體介導將其轉染到人胚胎腎細胞(HeK-293)細胞中, G418 篩選后得到陽性克隆hES/293，采用蛋白免疫印跡(Western blot)法檢測轉染細胞上清中ES蛋白的表達；用海澡酸鈉殼聚糖(ACA)微囊包裹hES/293細胞，分別收集培養3、7、21、35 d的ACA微囊化hES/293細胞的培養上清液，Western blot法檢測包裹后培養液上清中hES的表達。結果 重組質粒pEGFP-N1-ES經限制性核對內切酶HindⅢ和限制性核酸內切酶BamHⅠ雙酶切得到4700堿基對(bp)和600 bp 2條帶；PCR擴增出600 bp條帶；測序結果與NCBI上序列比對軟件（BLAST）比對，同源性達到100%。pEGFP-N1-ES轉染HeK-293細胞，經G418 篩選后獲得陽性克隆，選取篩選的10株單克隆細胞培養上清液進行Western blot分析，在相對分子質量為20times;103 處出現蛋白條帶。在ACA微囊內hES/293細胞隨著培養時間的延長，細胞團逐漸長大，充滿整個囊內空間。培養3、7、21、35 d時，在相對分子質量為20times;103處出現蛋白條帶。結論 重組pEGFP-N1-ES真核表達載體構建正確，轉染HeK-293細胞后可有效的表達hES蛋白，并能分泌到細胞外；微囊化hES/293細胞產生的ES蛋白可以自由擴散出微囊膜外，并呈持續性表達。
目的觀察藍光照射對人視網膜色素上皮細胞鈣離子(Ca2+)-蛋白激酶C(PKC)信號通路的影響。 方法體外培養并鑒定人視網膜色素上皮(RPE)細胞,取第4代人RPE細胞隨機分組進行實驗。采用蛋白免疫印跡法測定培養細胞PKC蛋白表達,檢測佛波酯(PMA)和鈣磷酸結合蛋白(calphostin C)對PKC活性的影響,確定PMA與calphostin C影響PKC活性的最適宜濃度。采用非放射性核素法測定藍光照射處理對培養細胞PKC活性的影響。采用20 W,波長450~500 nm醫用藍光燈作為光源,光照強度(2000±500) Lux,照射6 h,24 h后終止培養,以此制造體外培養人RPE細胞光損傷。將培養細胞隨機分成5個組,即無光照、單純光照、光照聯合硝苯地平、光照聯合calphostin C、光照聯合PMA組。其中,無光照組不接受光照;單純光照組僅接受光照;光照聯合硝苯地平組接受光照和0.1 mmol/L的硝苯地平;光照聯合calphostin C組接受光照和100.0 nmol/L的calphostin C;光照聯合PMA組接受光照和100.0 nmol/L的PMA。用乙酰氧基甲基酯Ca2+熒光探針標記各組培養細胞,激光掃描共焦顯微鏡測定各組細胞內Ca2+濃度。比較各組細胞內Ca2+濃度差異。 結果經鑒定,體外培養人RPE細胞成功。100.0、200.0 nmol/L PMA處理的RPE細胞中PKC蛋白相對表達量高于0.1、1.0、10.0、50.0 nmol/L PMA處理的RPE細胞,差異有統計學意義(F=217.537,P<0.05),但100.0、200.0 nmol/L PMA處理組間PKC蛋白相對表達量比較,差異無統計學意義(P=0.072)。100.0、200.0 nmol/L calphostin C處理的RPE細胞中PKC蛋白相對表達量低于5.0、25.0、50.0、75.0 nmol/L calphostin C處理的RPE細胞,差異有統計學意義(F=164.543,P<0.05),但100.0、200.0 nmol/L calphostin C處理組間PKC蛋白相對表達量比較,差異無統計學意義(P=0.385)。藍光照射處理后,RPE細胞的PKC活性顯著升高,與未接受藍光照射處理的RPE細胞的PKC活性比較,差異有統計學意義(t=-9.869,P<0.05)。單純光照、光照聯合硝苯地平、光照聯合Calphostin C、光照聯合PMA組的RPE細胞內Ca2+濃度均高于無光照組,差異有統計學意義(F=26 764.92,P<0.05);光照聯合PMA組RPE細胞內Ca2+濃度高于單純光照、光照聯合硝苯地平及光照聯合calphostin C組(P<0.05),單純光照組高于光照聯合硝苯地平和光照聯合calphostin C組(P<0.05)。 結論藍光照射后人RPE細胞內PKC活性增高,Ca2+濃度增高。硝苯地平和calphostin C均能降低藍光照射后人RPE細胞內Ca2+濃度,PMA增加細胞內Ca2+濃度。
目的長期觀察轉甲狀腺素蛋白（TTR）基因Gly83Arg突變致一家系玻璃體淀粉樣變性玻璃體切割手術繼發性青光眼的發生情況，探索其可能原因。方法回顧性病例研究。2008年1月至2020年1月于遵義醫科大學附屬醫院眼科確診為TTR基因Gly83Arg突變致家族性玻璃體淀粉樣變性的一家系13例23只眼納入研究。其中，男性7例12只眼，女性6例11只眼；平均年齡（43.0±4.8）歲。患眼均行經睫狀體平坦部標準三通道玻璃體切割手術。根據手術中是否形成完全玻璃體后脫離（PVD）分為完全PVD組和非完全PVD組；根據手術后繼發性青光眼發生及玻璃體淀粉樣變性復發時間分為1～12個月組、13～36個月組，＞37個月組。手術后平均隨訪時間（36.7±6.0）個月。組間繼發性青光眼發生率及玻璃體淀粉樣變性復發率比較采用χ2檢驗；手術后玻璃體淀粉樣變性復發和繼發性青光眼相關性采用Spearman秩相關分析。結果23只眼中，完全PVD組、非完全PVD組分別為8、15只眼。手術后玻璃體淀粉樣變性復發15只眼（65.22%，15/23）。非完全PVD組、完全PVD組分別為14（93.30%，14/15）、1（6.70%，1/15）只眼；兩組玻璃體淀粉樣變性復發率比較，差異有統計學意義（χ2=11.676，P＜0.01）。1～12個月組、13～36個月組、＞37個月組分別為1（4.35%，1/23）、12（52.17%，12/23）、2（8.70%，2/23）只眼。13～36個月組復發率顯著高于1～12個月組、＞37個月組。手術后發生繼發性青光眼11只眼（47.80%，11/23）。1～12個月組、13～36個月組、＞37個月組分別為1（4.35%，1/23）、8（34.78%，8/23）、2（8.70%，2/23）只眼。13～36個月組繼發性青光眼發生率高于1～12個月組、＞37個月組。繼發性青光眼11只眼中，手術后玻璃體淀粉樣變性復發眼10只，非復發眼1只。Spearman秩相關分析結果顯示，玻璃體淀粉樣變性復發與繼發性青光眼發生之間呈正相關（rs=0.516，P=0.012）。結論TTR基因Gly83Arg突變所致的玻璃體淀粉樣變性一家系玻璃體切割手術后繼發性青光眼發生率較高，其發生與玻璃體淀粉樣變性復發呈明顯正相關。